狐狸致病性大肠肝菌的分离与鉴定

随着黑龙江省养殖业结构的调整，经济动物养殖特别是狐貉养殖业已发展起来，逐渐成为黑龙江省养殖业的特色产业。但是由于气候、地理环境以及防疫措施不规范造成的经济动物的各种疾病时有发生。此外，近年来由于抗生素的滥用使得很多抗生素对病原菌的杀菌效果不尽如人意，一旦发病，不进行实验室诊断，病情很难控制，给养殖户造成了严重的经济损失。现将笔者遇到的狐狸致病性大肠杆菌病病原的分离与鉴定情况报道如下。

参考资料：貉子大肠杆菌病的防治

一、发病情况

该狐狸养殖户位于黑龙江省阿城市郊区，共养殖100只狐狸，2006年9月上旬开始有狐狸发病，发病率超过50％，4天后开始有狐狸死亡，用药3天后仍不见效果，发病率逐渐升高，死亡率较低，发病病程长。

二、临床症状和病理变化

发病初期狐狸轻度腹泻，随着病程的发展，腹泻加剧，体温升高至40℃左右，食欲减退，精神萎靡，个别狐狸有干咳症状，喜卧；后期体温下降，四肢发软，全身脱水严重，耳鼻发凉，结膜苍白，排便减少，呼吸困难，鼻流黄色黏液，病程可长达2周以上。剖检2例病死狐狸，基本特征为肝脏明显肿大、质脆易烂、大面积充血；整个肺脏充血、郁血、出血，水肿明显，边缘增厚，切面流出淡红色、泡沫样液体；心内膜有出血点；脾脏变化不明显，肾脏呈轻微水肿；肠管内有多量黏稠液体，肠黏膜肿胀、充血，肠系膜淋巴结肿大、呈暗红色。

三、实验室检查方法

1、涂片镜检

取剖检病变组织肺脏、肝脏和心血涂片，用革兰。和美蓝染色法染色，显微镜下观察细菌形态及染色特性。

2、细菌分离

无菌取病变组织肺脏、肝脏、心血分别接种于营养肉汤、血琼脂和麦康凯培养基上，用焦性没石子酸法37℃培养24小时，然后选择菌落进行纯培养。对纯培养物进行革兰染色，显微镜下观察细菌形态及染色特性。

3、生化试验

将分离到的菌株分别接种于生化发酵管，37℃观察1-5天。

4、致病性试验

取细菌纯化培养液，13000转/min离心1min，弃去上层液体，用等量无菌生理盐水收集菌体，并计数为1.72×10（10）mL，给12只18-24g小鼠（分成2组）腹腔注射，0.2mL/只；同时设对照小鼠2只，每只腹腔注射无菌生理盐水，0.2mL/只。观察发病情况、致死率及病理变化。

5、药敏试验

将上述经过鉴定的分离菌分别采取常规药敏片法进行药敏试验。

四、结果

1、镜检结果

革兰染色、镜检可见阴性、菌体形态一致、两端钝圆、单个存在的短杆菌；美蓝染色镜检可见两极浓染的短杆菌。

2、细菌形态和培养特性

从病变组织中分离到的病原菌，在血琼脂平皿上生长的菌落呈圆形、隆起、光滑、湿润、半透明、淡灰色，无溶血环；在麦康凯琼脂上生长的菌落呈红色，在厌氧环境中可以生长；在营养肉汤中培养24小时，液体呈均匀混浊，管底有沉淀物，液面有菌环。取菌落涂片，革兰染色、镜检，均可见形态一致、阴性、两端钝圆、单个排列的短杆菌；美蓝染色、镜检可见两极浓染的短杆菌。

3、生化试验

对分离菌进行生化试验，结果均符合大肠埃希菌生化特性（见表1）。

4、致病性试验

注射病原菌的12只小鼠均于24小时内死亡，对照组全部健活。剖检死亡小鼠可见肝脏、脾脏微肿大，有出血点；肺脏、心脏有点状出血；肠臌气。用肝脏、肺脏、心血涂片，美蓝染色、镜检，均可见两端钝圆、两极浓染、单个排列的短杆菌；将肝脏、肺脏、心血分别接种于麦康凯培养基，所获得的细菌与从发病狐狸分离到的细菌一致。

5、药敏试验

药敏试验结果表明：该菌对庆大霉素、多黏菌素、丁胺卡那霉素敏感；对强力霉素、痢特灵低敏；对先锋霉素、红霉素、四环素、青霉素、氨苄西林、链霉素、恩诺沙星、氧氟沙星表现耐药。

五、小结

1、经实验室细菌学检验、动物试验确诊此次狐狸发病为致病性大肠杆菌所致。大肠杆菌通常在人和动物体内存在，属常在菌，在正常状态下对人和动物不引起发病。当狐貉饲养环境卫生发生变化、饲养条件发生改变时，动物机体免疫力下降，使致病性大肠杆菌不断增殖而引起动物发病。另外，由于药物的不合理使用，使一些致病菌对常用药物产生耐药性。所以当狐狸发病后，养殖户应用恩诺沙星、氧氟沙星等广谱抗菌药均没有效果。从药敏试验中也可以看出，病原菌对红霉素、先锋霉素、链霉素、青霉素、恩诺沙星、氧氟沙星等耐药，而对卡那霉素、庆大霉素等敏感。用敏感药物对发病狐狸进行治疗，收到了明显的效果。

2、大肠杆菌易产生耐药性，所以在药物防治上不要盲目地长期大剂量使用某种药物，以免造成耐药菌株的出现，临床用药时建议以药敏试验结果为依据。在药物治疗的同时，还应注意配合补液、收敛等对症疗法以提高效果。

作者简介：

东北农业大学动物医院：孙玉国、吕占军、李德军、张建涛、姜颜语、余波