水貂阿留申病及对流免疫电泳检测法

任二军，刘　洁，刘进军，韩学良，王　静

（石家庄市农林科学研究院050041）

水貂阿留申病又称浆细胞增多症，是由阿留申病病毒(ADV)引起的一种缓慢发展的进行性衰弱的疾病，侵害单核一巨噬细胞系统，以浆细胞弥漫性增生、进行性免疫复合物形成、产生多量γ球蛋白以及持续性病毒血症为主要特征。临床主要症状为肾小球肾炎、动脉血管炎和肝炎，严重影响水貂繁殖机能和毛皮质量，造成公貂配种能力下降，母貂空怀、流产、死胎及感染子代等，给养貂业造成极其严重的经济损失，为水貂三大疫病之一。我国黑龙江、辽宁、吉林、山东、河北等地普遍存在该病，感染率为30%～40%，有的高达到80%～90%。近年来，由于大量从国外引进种貂，养殖户的饲养水平开始与国际接轨，养殖意识明显提高，逐渐认识到水貂阿留申病对水貂养殖业的危害，一些规模化养殖场已经开始对阿留申病进行检测和淘汰。

阿留申病的主要传染源是病貂和带毒貂。病毒从尿、粪和唾液中排出而污染外界环境，经过消化道和呼吸道传染健康水貂。治疗和预防接种时混用针头，抓捕水貂的笼具、手套、匀食等接触均可造成本病的传播。另外，该病还可垂直传播，即感染种兽可将病传染给仔兽。

目前，该病无疫苗可以使用，也无特效治疗方法，只能通过检测、淘汰来净化貂群。常用的检测方法为对流免疫电泳(CIEP)检测法。此法特异性强，检出率可以高达98　%～100%，30～60min即能判定结果，是一种比较理想的诊断方法，目前己在国际上广泛采用。

1　材料和用具

采血材料：毛细玻璃管(20%L肝素钠抗凝的毛细玻璃管，长度75mm，直径1.55mm）、标签纸、记号笔、毛细管盒、保定笼、指甲刀、工业橡皮泥、一次性橡胶手套、烘箱、10%甲醛溶液。

电泳材料：电泳仪、电泳槽、玻璃板、打孔器、台灯、1O%L加样器、50mL刻度塑料管、微波炉、量筒、三角瓶、小砂轮、注射器、纱布、抗原、标准阳性血清、电泳缓冲液（Tris　2.408　g，巴比妥钠4.064　g，巴比妥1.　024　g，蒸馏水500mL，并用稀盐酸调节pH值至8.6）。

2.　操作步骤

贴标签：将水貂产箱和毛细管盒上分别黏贴一式两份的标签纸，标明水貂的栋舍号及笼号，以方便的查找水貂的位置，对阿留申貂进行淘汰。

采血：一人使用保定笼，将水貂从养殖笼中取出，采血者将水貂脚趾从保定笼的空隙中拉出，用消毒过的指甲刀在趾甲与肉的结合处剪断趾甲，待出血后弃去第一滴血，然后将毛细玻璃管一端轻触血滴，通过虹吸作用，血液自行流人毛细管中，待血流人管的2/3处，用手指堵住毛细管的上端，另一端垂直插入工业用橡皮泥进行封口，然后按照编号顺序放入毛细管盒（每盒可放置12只毛细管）中。将毛细管盒封口端朝下竖直放置，以利于血清的析出，如果不能及时检测，则放置在4℃冰箱中保存。注意采血时不要断流，否则检测时血液容易凝固，导致血清析出量少或无血清析出，影响检测结果。

3对流免疫电泳检测

琼脂糖凝胶板的制备：取1mm厚、10×10　cm的耐高温玻璃板，洗净120℃烘干后平放于水平支架上，用琼脂糖和缓冲液在三角瓶中配制1%的琼脂糖凝胶，放人微波炉加热，待琼脂糖完全溶解呈透明状，取30ml%的琼脂糖均匀倒在玻璃板上，待冷却后打孔。

打孔：将上述琼脂板平放置于打孔模型图纸（SN-T　1314　-　2003水貂阿留申病对流免疫电泳操作规程）上，用凝胶打孔器按图打孔，孔径3mm，孔距6　mm，孔内的琼脂糖可用注射器的针头挑出。

加样：将毛细管用砂轮在血清与红细胞界面轻划，用手掰断毛细管，将血清按顺序逐份加到血清孔内（左侧），加满为止，勿使外溢；抗原加到另一排抗原孔内（右侧），每孔约1OμL。每块板设一个阳性血清对照.

电泳：加样完毕后，将玻璃板放在电泳槽架上，血清孔放在阳极，抗原孔在阴极，将用电泳液浸泡过的双层湿纱布搭在琼脂板上，纱布的宽度为10　cm，电泳槽两侧注入电泳缓冲液，液面高度距槽顶约1cm。调整电压至90～100V，待电压稳定之后，再电泳30～60min。

结果观察：电泳结束，取出琼脂板，在日光灯下观察结果。在抗原孔和血清孔之间稍稍偏向血清孔处形成一条直的或稍弯曲的沉淀线，即判定阳性。没有沉淀线为阴性。

4检测时间

为了控制本病，每年应做2次电泳检测，第一次是在精选时，第二次是在配种前，对种貂逐一检测，阴性的留种，阳性的转为皮兽或淘汰。