鸡疫病微生物检疫的准备工作

吕国荣

(福建省浦城县农业局动物卫生监督所　353400)

普通的实验室内均可利用微生物学方法检出鸡的病原菌。涂片镜检，可知细菌的染色特征和细菌的形态结构；分离培养，可知细菌的生长特性，菌落形态特征、生化反应特征；小动物接种实验，可知对敏感动物的致病性，并可从中获得纯分离菌。通过上述几个步骤的工作，基本上可确定某种传染病。但是，有时也不尽如人意。这取决于病理材料的采取方法、保存、包装、运送的方法是否得当。为了使检验结果准确，必须注意其操作技术。

1　病料的采取

1.1　病料的采取时间

内脏病料的采取，须于病鸡死后立即进行，最好不超过6h，如果时间过长，由于肠道微生物的侵入，使尸体易于腐败，有碍病原菌的检出。

1.2　采取病料所用器械和容器的准备

刀、剪、镊子等用具可煮沸消毒30min。使用前，最好用酒精棉球擦拭，并在火焰上烧一下；玻璃制、陶制和珐琅制器皿要高压灭菌、干烤灭菌或投于0.5%～1.0%的碳酸氢钠水中煮沸；软木塞和橡皮塞置于0.5%石炭酸水溶液中煮沸1Omin；载玻片在1%～2%碳酸氢钠水中煮沸10～15　min，水洗后再用洁净纱布擦干，将其保存于酒精或乙醚等溶液中备用；注射器和针头放人清洁水中煮沸30min即可。为了提高检出率和准确率，采取一种病料使用一套器械和容器，不可再用其采取其他病料或容纳其他脏器材料，所以器械与容器准备要充分。

1.3　各种脏器及组织材料的采取

鸡体型小，可将整尸用不漏水塑料薄膜、油纸或油布包裹好送往实验室，随取病料随检验，或整尸保存。有时需要时间较长，整尸不易保存，仍以单项采取病料、单项保存为好。另外，由于传染病的种类不同，采取病料的种类也不同。在没有确诊为哪种传染病时，尽可能全面采取。为了避免杂菌的污染，应先取病料再检查病变。

①脓汁的采取方法：用灭菌的注射器或用灭菌的吸管、灭菌的巴斯德毛细玻璃管抽取，或吸取脓肿深部的脓汁，置于灭菌试管中。若为开口化脓灶时，则用棉签浸蘸法，放入灭菌试管中。②内脏器官的采取方法：将脾、肝、肺、肾等内脏有病变的部位剪取或整体取出，分别置于灭菌试管或平皿中。③血液的采取方法分以下3种情况。情况一：采取血清：以无菌操作吸取血液1OmL，置于灭菌试管中，待血液凝固析出血清后，吸出血清置于另一个灭菌试管中。情况二：采取10　mL全血，立即注入盛有5%柠檬酸钠液1　mL的灭菌试管中，搓转试管，混合均匀即可。情况三：心血的采取通常在右心房处。先用烧红的铁片或刀片，烙烫心肌表面，然后用灭菌的尖刃外科刀自烙烫处刺一小孔，再用灭菌吸管或注射器吸出血液，盛于灭菌试管中。④胆汁的采取：先用烧红的铁片或刀片烙烫胆囊表面，再用灭菌吸管或注射器刺入胆囊吸取胆汁，盛于灭菌试管中。⑤肠管及肠内容物的采取：用烧红的铁片或刀片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔，持灭菌棉签插入肠内，采取肠黏膜及内容物；亦可用线结扎一段肠管的两端(约6cm)，切取后置灭菌试管中。

2.　病料的保存

病料的正确保存方法，是病料保持新鲜或接近新鲜状态的根本保证，是病料最后确诊无误的重要条件。供细菌学检验的材料保存剂包括：灭菌液体石蜡、30%甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。供细菌学检验的液体材料，可用封闭的巴斯德毛细玻璃管或试管运送。运送肠道时，先清除肠内粪团，用灭菌生理盐水清洗后，置于盛有上述保存液的试管中即可。生前由直肠中采取的粪便，可移入灭菌容器中运送。供病毒学检验的材料保存剂包括：灭菌的50%甘油缓冲盐水或鸡蛋生理盐水溶液[养殖网:www.nczfJ.com/]。

3　病料的记录、包装及运送

所采病料与保存的病料，如本场无条件进行有关的检验项目，就需送往有条件的单位进行，并附上送检单，包装妥当再运送。

3.1送检单

病料送检时应附送检单或送检说明书，一式3份。其中1份自存备查，另2份随病料送化验室，待检验完毕后，退回1份。

3.2　病料的包装和运送

①液体病料包括：黏液、渗出液、胆汁等。收集在灭菌的细玻璃管中，管口用火焰封闭。将封闭的玻璃管用废纸或棉花包裹，装入较大的试管中，再装入木盒中运送。用棉签蘸取脓汁和鼻液等物，置于灭菌试管内，剪去多余的签柄，严密加塞，用蜡封闭管口，再装入木盒中寄送。②盛装组织或脏器的玻璃容器：包装时力求致密而结实，最好用双重容器。将盛病料的器皿加塞用蜡封口后，置于内容器中，内容器中衬垫废纸。当气候温暖时，需加冰块，且忌病料与冰块直接接触，以免冻结。将内容器置于外容器中，外容器内置以废纸、木屑及石灰粉等，再将外容器封闭好。内外容器间所夹废纸等物之量，以盛病料的容器万一破碎时，能完全吸收其液体为度。外容器上需注明“上方向”，并写明“病理材料”、“玻璃器皿”、“小心轻放”等字样。也可用广口保温瓶装病料寄送，最好在保温瓶中放一些氯化钠，冰块置于氯化钠之上，如此可使冰块维持48h不融化。无冰块，可在保温瓶中放入氯化铵450～500g，加水1500　mL，也可使保温瓶内温度保持0℃达24h。③病料送检：病料装于容器内至送到检验部门的时间应越快越好。运送途中，避免病料接触高温和阳光，以免病料腐败或病原体死亡。以鸡白痢病料的采取为例：活鸡血液作全血平板凝集反应，粪便供细菌学检查；死后，采集鸡心血、肝、脾、肾及未吸收的卵黄（雏鸡）或变形卵巢（成鸡）。

4玻片书写液的配制方法

需要保存的病理组织切片和微生物抹片，都应在玻片的一端贴上标签，但往往因为标签纸被磨损或受液体浸渍而使字迹模糊。为此，配制书写液用钢笔尖蘸取直接写在玻片上。这种书写液使用方便，干燥快，不受水或酒精等有机溶剂的影响，且时间越久越牢固，不易脱落。配方如下：火漆（研成细粉末状）8～1Og，水泥（研成细末过筛）0.5g，苏丹Ⅲ1.　5g，汽油50　mL。将上述4种成分放入广口瓶中振荡均匀，置于37～60℃温箱中，待汽油挥发净后，成为干燥的块状物，取出研成粉末，放人瓶中备用。用时取出粉末20g，加入加拿大树胶40　mL，二甲苯60　mL。混匀即可。字迹为红黄色，清晰可辨，久之呈棕红色。