鸡舍环境中细菌的种类和数量的研究

探讨鸡舍环境内积尘真菌的生物多样性和空间分布规律。采集封闭式鸡舍内4个不同高度(距地面0、75、150、225 cm)的积尘样品进行真菌的生物多样性及分布规律研究.采用PDA和RBC 2种真菌培养基进行分离、纯化、鉴定。从封闭式鸡舍中共获得507株15种类群的真菌,其中包括黄曲霉(3.13×104 cfu/g),镰孢菌(8.61×104 cfu/g),酵母菌(3.53×104 cfu/g)等3种优势菌真菌属。积尘中真菌总浓度达2.03×105 cfu/g.2种真菌培养基比较表明,无论从分离的种类还是分离的数量,PDA的分离效果都好于RBC.研究还发现,积尘中的真菌浓度随着高度的上升而下降.该研究为鸡舍的日常管理及由真菌引起的流行病的防治提供了重要理论依据.下面具体来了解一下：鸡舍环境中细菌的种类和数量的研究。

1、材料和方法

1.1　培养基与培养皿

营养琼脂培养基，按常规方法制备，将营养琼脂平板置于37℃恒温箱中培养24　h，无菌生长者方可应用。培养皿直径约90　mm，面积约63.6　cm2。

1.2稀释液

选用0.9%的生理盐水作为样品稀释液，每支试管中装液量为10　mL，高压蒸气灭菌后备用。

1.3样品采集、处理与培养

1.3.1采样地点

黑龙江省牡丹江市某鸡场的母鸡舍。

1.3.2采样时间

第1、5、10、15、20天，上午（7点）、中午（12点）及下午(17点30分)三个时间段采样。

1.3.3　空气样品的采集与细菌培养

取5个营养琼脂平板，将平皿盖打开置于鸡舍内离地面1.5　m的地方（鸡舍四周及中间各一个），5min后盖上平皿盖，于37℃恒温箱中培养48h。

1.3.4墙壁样品的采集

选择三面墙壁（东、西、北墙）．每面墙壁分取5个点作为一个样品，将中心有一正方形孔(2cm×2cm)的铝片贴在所选择的点上，用蘸有无菌生理盐水的棉拭子在墙壁的取样点上涂擦几下，每个点用一支棉拭子，最后把5个棉头剪下放入含10mL灭菌生理盐水的试管中，室温浸泡30min，作为待检样品。

1.3.5鸡体表样品的采集

选择鸡舍不同位置的三只鸡，每只鸡取体表5个不同部位（背部，腹部，翅膀外侧，翅膀内侧，腿部）作为五个样品，每个样品采3只鸡。将中心有一正方形孔(2cm×2cm)的铝片贴在所选择的点上，用蘸有无菌生理盐水的棉拭子在鸡体表的取样点上涂擦几下，每个点用一支棉拭子，将3只鸡的同一部位的棉头剪下放入含10mL灭菌生理盐水的试管中，室温浸泡30　min，作为待检样品。

1.3.6样品的处理与培养

将待检样品用灭菌生理盐水做10倍的倍比稀释，选择适当的两个相邻稀释度，各取O.1mL稀释液滴加到营养琼脂平板中，每个稀释度用2个营养琼脂平板，用L型玻璃棒将液体轻轻涂布均匀，平板置37℃恒温箱中吸附2h，翻转平板培养至48　h，进行菌落计数。

1.4菌落计数

1.　4.1空气中菌落的计数方法

先直接数出5个平板中所有菌落总数，然后取平均值，再按照以下公式计算每立方米空气中的细菌总数。

空气的细菌总数（个/m3）=N×100/A×5/T×100=50000N/AT

A:平板面积(cm2)

N:平均菌落数

T:平板暴露于空气中的时间

1.4.2墙壁及鸡体表菌落的计数方法

首先选择平均菌落在30-300间的平板，然后数出每个平板的菌落总数，再按稀释度根据以下公式计算每平方厘米的细菌总数。

墙壁的细菌总数（个／cm2）=菌落数×稀释度×A×B／C

体表的细菌总数（个／cm2）=菌落数×稀释度×A×B／D

A=10，表示涂抹棉头所放在的10　mL生理盐水；

B=10，表示每个稀释度取O.l　mL涂抹平板；

C=20，表示每个样品的面积(2×2×5)；

D=12，表示每个样品的面积(2×2×3)。

1.5　染色与镜检

认真观察各菌落的形态，对不同培养性状的菌落进行涂片、革兰氏染色及镜检，区分出革兰氏染色阳性(　G+)菌、革兰氏染色阴性(G)菌、球菌及杆菌。

2、结果

由表3可以看出，鸡体表细菌数量的分布规律是：背部>腿部>翅膀外侧>腹部>翅膀内侧。

2..4环境中细菌的形态

选择典型菌落进行涂片和革兰氏染色，显微镜检查，镜下多见葡萄状球菌、短链球菌、散在的短小杆菌、有芽孢的杆菌及棒状杆菌等。

3、小结与讨论

鸡舍空气中细菌的数量以上午最多，因清粪时间通常安排在早上，清扫地面时使尘埃大量漂浮在空气中，故增加了空气中的细菌量。而中午温度最高，空气干燥，所以细菌数较少。对细菌的革兰氏染色和镜检结果表明，空气中以革兰氏阳性球菌最多，革兰氏阳性杆菌次之，革兰氏阴性菌所占比例低于2.　5%。球菌中，以葡萄球菌多见；杆菌中，以芽孢杆菌为主。

鸡舍墙壁上的细菌数量以西墙最多，东墙次之，北墙最少。经现场观察，这是由于鸡舍的窗户分别设在南墙和北墙上，故北墙受风面大，较干燥，细菌也较少。而西墙最阴暗，故菌数最多。鸡体表细菌数量的分布规律是：背部>腿部>翅膀外侧>腹部>翅膀内侧。

分析表明，由于空气中的尘埃最容易降落到鸡的背上，故此部位细菌数最多；而腿部经常接触到黏在铁笼上的粪便，故细菌数也较多；翅膀内部羽毛较少，加之常合拢于鸡体两侧，污染物较少，所以细菌数也最少。

通过对鸡舍墙壁上及鸡体表的细菌形态学观察，发现革兰氏阳性菌多于革兰氏阴性菌，球菌多于杆菌；与空气中的细菌类型相一致。

实际工作中，要做好鸡舍环境卫生，及时清扫鸡粪，注意通风换气。要根据鸡舍中及鸡体表上细菌的数量和类型，选择有效的消毒药物，建立科学合理的防御措施，减少疾病的发生，提高经济效益。