猪支原体肺炎的临床症状 猪支原体肺炎的实验室诊断法

猪支原体性肺炎又称猪喘病或地方性流行性肺炎,是猪特有的一种接触性传染病。该病由呼吸道的飞沫传染,多为慢性经过,主要临床症状是咳嗽和气喘,而体温和食欲一般没有明显的变化。虽然该病的死亡率不高,但由于流行的广泛性、长期性和消耗性,所导致的经济损失又是巨大的,对集体养猪和机械化养猪业的迅速发展威胁较大,所以对该病进行及时的诊断很有必要。下面具体来了解一下：猪支原体肺炎的临床症状 猪支原体肺炎的实验室诊断法。

1、猪肺炎支原体的分离与鉴定

形态特征：用病猪肺炎病灶直接触片或用培养物涂片检查，如发现以环状为主的多态形微生物即可初步认为是该病的病原体。

培养特性：将病肺接种于无细胞培养基中，连续传代几次后，可见pH值改变并有轻微混浊。经涂片染色镜检，见有猪肺炎支原体特异形状的菌体时即可作出阳性判定。

致病性测定：将无细胞培养物接种健康仔猪，如出现典型喘病者，即为猪支原体肺炎。

代谢抑制试验：有人进行了初步试验，将猪肺炎支原体注射于家兔进行高度免疫后，取其血清加入培养物中能抑制pH值的变化，这是一种简便的特异诊断法。

生长抑制试验：据报道，有人犄制好的抗猪支原体肺炎血清的干燥圆纸片，放在接种菌体的平皿内培养1-2周后，在低倍显微镜下观察其生长抑制情况，如抑制圈大于1mm者即为猪支原体肺炎。

2、血清学诊断法

近年来对该病的血清学诊断方法，诸如补体结合试验、微量补体结合试验、琼脂扩散试验、琼脂明胶电泳试验、酶联免疫吸附试验、生长沉淀试验、凝集试验及荧光抗体技术等虽已有试验报告，但还没达到实用程度，现介绍两种简单方法，供诊断时参考。

微粒凝集试验：据报道，将病猪血清与猪肺炎支原体按一定比例混合后，在恒温箱中培养24-48h，取出染色镜检，发现有菌体凝集者即为阳性。这种方法经过初步试验，认为既可作为猪场传染病的普查，又可以鉴定支原体种属。用作普查时，则较X线诊断简单易行。

间接红细胞凝集试验：据报道，应用本法检查81头人工感染猪，其中76头血清抗体价达1：20(++)以上的占93.8%；检查来自健康猪群的150头，血清抗体价均＜5，与X光胸透或解剖结果相符。后来又对自然发病猪场中的27头猪进行检查，也获得相似的结果，因此认为本法反应敏感，特异性明显，可重复性良好。另据报道，还有人也做了同样的试验，检查健康猪81头，均为阴性，对X线透视为(+)的52头阳性检出率为82.7%；X线透视为（++和+++）的32头，阳性率则为100%，故认为本法对诊断猪喘病是特异性的，检出率高，比X线透视较为优越。从这些试验结果来看，如果有标化抗原和致敏红细胞的供应，无疑对猪喘病的普查有着十分实用的价值。

近年来，在该病的血清学诊断方法方面，还进行了不少试验，取得了可喜的成果。有人用对流免疫电泳试验检测猪肺炎支原体抗体，认为是一种快速而经济的检验方法，但其反应的特异性取决于抗原的纯度与效价，本试验应用超声波处理的浓缩抗原可获得较为满意的结果，与微粒凝集反应的结果具有显著一致性(P<0.05)。还有人用微量全血酶联免疫吸附试验诊断该病，对病猪的检出率可达97.8%，阴性符合率为98.　5%，是一种简便、敏感、经济、实用的血清学诊断方法。应用微量琼脂凝胶双扩散试验诊断该病，认为其检出率高于对流免疫电泳及X线透视法，由于操作简便，特异性高，适用于大批猪的检疫诊断，但这些方法尚待进一步试验和标化，才能推广应用。

3、人工感染试验

取待检的肺炎病灶制成10倍组织悬浮液，加入适量青霉素及链霉素后，对2头健康仔猪各滴鼻5mL，猪出现典型气喘病时即可确诊。

4、鉴别诊断

猪流行性感冒：是一种急性流行病，突然暴发，传染迅速，数天之内即蔓延全群。临床症状明显，体温升高，精神和食欲高度不振，病情虽重，但病期短，死亡率低；病原为猪流行流感病毒和猪流感嗜血杆菌。而猪喘病则流行过程持续顽固，病期长，经历慢，除气喘咳嗽外，体温、精神和食欲的变化一般都不明显。

猪肺疫：为散发性或地方流行性，临床上有明显的败血症症状，如体温升高，食欲废绝，急性病例可在1-2天内死亡。剖检见败血症变化和纤维素性肺炎。发病早期应用链霉素及磺胺类药物治疗有相当的效果，但是此病常与咳喘病合并发生，因此诊断时应认真观察和分析。

肺丝虫病及蛔虫病：均能引起猪咳嗽，并在剖检时也偶见有支气管炎，但仔细检查可发现肺丝虫及蛔虫幼虫，且炎症变化多位于膈叶后端，粪便检查可发现虫卵或肺丝虫幼虫。但有时会合并感染，因此深入了解猪群有无喘病及肺丝虫病的病史十分必要的，诊断和治疗时应加以注意。

1、猪支原体肺炎的流行病学和发病机制
 目前，商品猪场几乎100%感染猪肺炎支原体，带菌散毒猪群普遍存在。仔猪出生后两周内，一般不会自然感染猪支原体肺炎。随着日龄增加，应激增大、抵抗力降低，感染几率随之提升。感染猪肺炎支原体后的潜伏期为3周左右，所以咳嗽症状多出现在7周龄之后，10周龄为发病和抗体转阳高峰，被称之谓“十周龄墙”。
 猪肺炎支原体通过空气中的气溶胶，经呼吸道感染，首先黏附在猪呼吸道纤毛顶端，进而繁殖并释放代谢中间产物，使纤毛脱落、黏膜受损，呼吸道屏障系统被破坏。吸入空气中的异物、黏膜分泌物和脱落的纤毛，沉降到肺泡中，导致连续干咳和气喘的发生，并逐渐形成肺脏肉变或胰样变。肺脏功能遭到破坏，生长受阻、饲料转化率下降；同时呼吸道纤毛脱落，失去过滤异物、清除病原的能力，增加了其它病原混合感染可能。
 猪肺炎支原体能长期定居于猪呼吸系统，且具有免疫逃避的特性，难以通过药物或免疫清除，经常反复发病。而纤毛脱落和肺部实变，均是不可逆的，一旦发生终生受其影响，严重的可变成僵猪。
 2、猪支原体肺炎的临床症状与咳嗽指数
 感染猪肺炎支原体后的猪群，体温和食欲无明显变化。发病初期多表现连续性的干咳，后期出现气喘、呼吸困难（猪呈腹式呼吸），部分严重的极度消瘦。若继发感染其它细菌和病毒，则体温升高，死亡率增加。临床上为了与其他因素引起的咳嗽症状进行区分，
现将不同因素引发的疾病与咳嗽类型和所对应的临床表现总结如下：猪传染性胸膜肺炎表现为咳嗽、体温高且口鼻流有泡沫或带血黏液、可视粘膜发绀等；猪肺疫表现为连续咳嗽、时有喘鸣声、咽喉部肿胀导致呼吸困难呈犬坐、体温升高等；副猪嗜血杆菌病表现为短促咳嗽、流脓鼻液、发热、腕、跗关节肿大等；猪萎缩性鼻炎表现为咳嗽、打喷嚏、鼻歪、有黑色泪斑等；猪繁殖与呼吸综合征表现为咳嗽、流鼻涕、高热、精神沉郁等；猪链球菌病表现为咳嗽、高热、关节肿胀等；猪丝虫病表现为阵发性咳嗽、脓粘性鼻涕；猪流感表现为阵发性咳嗽、体温升高、眼鼻有粘性分泌物；异物性咳嗽表现为突发的连续性、剧烈、痛苦的咳嗽，异物咳出后，咳嗽平息。
  在育肥猪群中以典型的连续性干咳为统计目标，测定咳嗽指数对评价猪肺炎支原体的感染和发病程度有一定意义，方法如下。
  对每个育肥舍的猪进行随机选择，通过喊叫、拍手和惊吓三分钟后的一段时间观察，咳嗽十秒后不再咳嗽，计下咳嗽数。对同一批猪，重复一次，并以同样的方式对另一批猪进行测试。平均咳嗽指数=咳嗽猪的数量/总检测的猪数×监测总时间。所建立的定量评估育肥猪干性咳嗽评估体系配合猪肺炎支原体血清血检测，更具有衡量群体免疫水平价值。
 3 、猪支原体肺炎的病变特征与病变指数 

病初期剖，检肉眼可见心叶有点状、小片状肺部硬化，周围组织下陷低于周围正常肺组织，肺门淋巴结肿大。后期剖检可见肺脏呈对称状肉变、实变、虾样变。猪传染性胸膜肺炎肺部有紫红色肝变、肺炎区坏死、硬化、粘连；猪肺疫肺紫色肝样变且常有坏死；副猪嗜血杆菌病肺脏表面有纤维素性渗出；蓝耳病肺前叶有肺炎实变灶；猪链球菌病呈化脓性肺炎状；猪丝虫病肺膈叶后边缘有楔形气肿灶，内部有灰红色实变；猪流感肺脏前下部紫红色实变、气肿、出血。
 根据江苏省农科院兽医研究所邵国青等制定的猪支原体肺炎肺脏病变评判标准（见下表）对剖杀猪的肺部病变进行判定。猪肺脏由7个肺叶（左右心、尖、膈叶，副叶）构成，各肺叶得分相加即为肺病变得分，最大得分为28分。

  通过临床症状和肺部病变可作为初步的临床诊断，而且咳嗽指数和病变指数评价体系证明，猪肺炎支原体引起的肺部损伤与气喘病典型的临床症状有着紧密的联系。但在复杂的混合感染状况下，疾病确诊和损失评价仍需要借助于实验室检测手段。
 4、猪肺炎支原体实验室检测方法
 4.1 猪肺炎支原体血清学检测  目前多采用ELISA方法检测，前腔静脉采血，血样需冷藏保存并于两天内送达实验室，分离到的血清-20℃保存、备用。由于无法区别疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，在对猪群免疫之前，先对猪群随机抽血采样，作为猪支原体肺炎感染率评价指标之一。对没有血清抗体的猪群进行疫苗免疫，二十天后抽血检测，作为猪群免疫后的评价指标。临床上评价猪支原体肺炎感染程度和损失大小，仍需结合其它指标。试验证明，猪群自然感染MPS病引发气喘病时，血清阳性率≥0.5时，一般咳嗽指数≥2.5%。如果血清阳性率≥0.5，而咳嗽指数<2.5%，说明猪群感染了猪肺炎支原体，但临床防控效果较好。如果血清阳性率<0.5，而咳嗽指数≥2.5%，说明呼吸道疾病混合感染严重。
 4.2猪肺炎支原体病原学检测  取感染的肺组织直接分离猪肺炎支原体来诊断猪气喘病最为可靠，但直接分离要求较高、且费时费力，临床上这项“金标准”很难实现。因此，选用其他方式来诊断猪肺炎支原体的感染十分必要。
  目前，应用最广、操作最方便的是PCR（普通PCR方法、套式PCR方法、多重PCR方法、荧光定量PCR方法、LAMP、芯片检测等）。普通PCR是猪肺炎支原体检测常规方法，具有简洁、方便、快速节约成本的优点。多重PCR方法，可同时检测其他病原，节约了时间；荧光定量PCR，可以达到准确定量的目的；芯片检测是一种更快速、敏感和特异的方法，但费用过高。
 病、死猪尸体采样，猪剖杀后用生理盐水冲洗肺脏，剪切正常与病变交界处的样本即可，是目前最常用的采样方式。活体采样不必剖杀猪只，可选猪的鼻腔拭子、咽、气管拭子或肺泡灌洗液等方法，灌洗液检出率与感染情况最为符合，其它依次为咽、气管拭子、鼻试子。采集空气样本中的气溶胶，需专用气泵抽取猪场内空气，注入到无菌PBS，后高速离心，收集沉淀进行检测。此方法评价病原的气溶胶传播情况，对猪场的猪肺炎支原体临床净化、监测提供便利。
 5、猪肺炎支原体的防控
 猪肺炎支原体通过空气飞沫在环境中传播，其传播距离可达9.2km，健康猪接触病猪或吸入空气中带有猪肺炎支原体的气溶胶而发生感染，一旦发现感染猪应立即隔离、治疗。传统的呼吸道药物虽不能治疗猪支原体肺炎，但在一定程度上起到控制和缓解。对呼吸困难（尤其是颈部肿胀）的猪不建议颈部肌肉注射，通常将对猪肺炎支原体敏感的药物（如土霉素、卡那霉素、林肯霉素、泰乐菌素等）加到饮水或食物中，对于重病猪可后肢注射尼可刹米缓解呼吸困难，同时针对某些特定的症状对症治疗及预防其他病原菌的继发感染。饲养管理中添加黄芪多糖、淫羊藿皂苷、维生素等进行猪群保健提高机体抵御外界野毒的感染能力。
  由于猪肺炎支原体只有一个血清型，疫苗免疫是最有效的预防手段。仔猪出生后两周内，一般不会自然感染，但随着日龄增加、应激增大、抵抗力降低、感染几率随之提升。小猪在7-14日龄，肺内免疫高效的猪肺炎支原体弱毒活疫苗168株，直达靶部位，占据呼吸系统纤毛受体位点，形成优先占位效应；同时，弱毒疫苗株的快速繁殖诱导机体产生局部粘膜免疫和细胞免疫；即使环境中再有猪肺炎支原体野毒存在而进入呼吸道，也会因缺乏受体位点而难以附着、生长、繁殖，最终被黏膜抗体捕获、吞噬、清除。由于猪肺炎支原体具有免疫逃避特性，且猪呼吸系统粘膜纤毛的特殊结构，造成体液免疫抗体水平不足以有效地清除猪肺炎支原体野毒和形成有限的免疫保护力。  由于猪肺炎支原体对一些消毒剂及恶劣环境具有抵抗力，一旦感染本病很难彻底净化。目前，国外通过疫苗和药物，采用全进全出管理制度及单独通风和清粪系统，在不完全减群的情况下初步净化了育肥群中的猪肺炎支原体；国内，邵国青等建立了以免疫、消毒、隔离、淘汰为主要技术措施的猪支原体肺炎控制和净化技术，并取得了显著效果。
  猪支原体肺炎多发生于通风不良、饲养环境改变、猪群运输、转群、混群应激、湿度过高、气温骤变等因素下。为有效地防控猪支原体肺炎在养猪生产中带来的危害，建议做到以下几点：
一、加强饲养管理，控制好环境因素（温度、湿度、空气质量、光照、猪圈清洁度等）；
二、提供全面的营养；
三、减少应激因素；
四、全进全出，空圈并进行严格消毒；
五、三点式繁育体系，将产房、保育和育肥分开饲养；
六、坚持自繁自养，如需引猪，要做好严格的检疫和隔离措施；
七、适时的猪肺炎支原体弱毒活疫苗免疫。