猪细小病毒病的临床症状 猪细小病毒病的诊断及防控措施

猪细小病毒病又称猪繁殖障碍病。是由猪细小病毒引起的一种猪的繁殖障碍病。以怀孕母猪发生流产、死产、产木乃伊为特征。猪细小病毒病是由猪细小病毒（PPV）引起的一种猪繁殖障碍病，该病主要表现为胚胎和胎儿的感染和死亡，特别是初产母猪发生死胎、畸形胎和木乃伊胎，但母猪本身无明显的症状。下面具体来了解一下：猪细小病毒病的临床症状 猪细小病毒病的诊断及防控措施。

1、流行特点

感染病毒的母猪或者公猪是该病的主要传染源，且能够通过交配或者胎盘导致胎儿感染，还可经由污染病毒的物质或者消化道等导致其他易感动物感染，从而使其变成该病的传染媒介不断传播。母猪、胚胎以及仔猪等是该病毒最直接的感染对象，但仅有母猪能够在繁殖方面出现障碍，且对于不同品质或者年龄的猪会表现出不同的临床症状。待产母猪是最常见感染病毒的类型，且只要待产母猪感染病牛，在3个月内就会导致整个母猪群发生感染，即使大于1岁的公猪，感染率也能够达到80%-100%，表明该病具有非常强的传染性。猪群只要发生感染，在今后几年内都会经常出现母猪繁殖失败的现象。母猪要在妊娠后感染病毒，经过1-2　h排出的粪便中就含有病毒，从而导致环境被污染。该病的发生没有明显的季节性，但由于母猪通常在春季和秋季分娩，因此在这两个季节的发病率相对较高。

2、临床症状

该病的临床症状及危害性主要体现在导致胚胎和胎猪的患病甚至死亡。对于母猪尤其是初产母猪以及血清学呈阴性的经产母猪，只要感染病毒发生病毒血症，就会通过血液循环使病毒到达胎盘，导致通过胎盘感染。母猪妊娠的各个时期感染病毒，都会发生流产、死胎、弱仔、木乃伊等不同症状，而母猪自身不会表现出其他明显的临床症状。

妊娠早期感染，一般会导致胚胎发生死亡，且母体会逐渐将其吸收，从而导致产仔总数减少，有时还是导致母猪发情异常、空怀以及屡配不孕的重要原因。妊娠中期感染，即46-60天左右的胎儿感染病毒通常会木乃伊化，或者成为异常胎儿，此时往往会在正常分娩时产出死亡胎儿，就算有个别仔猪能够存活，也会存在异常现象，主要表现出体质瘦弱，无法站立，具有较差的后天生存能力，一般出生后很快发生死亡，部分过于虚弱的胎仔，在分娩过程中会由于窒息发生死亡。妊娠中后期感染，胎儿感染病毒后会在其体内不断增殖，并形成免疫应答，分娩时就会产出具有正常外表的活仔，但其一般会携带病毒以及抗体，还有部分仔猪会形成免疫耐受性，成为长时间携带病毒的猪。其他情况下感染，即母猪患有严重的胎盘炎，或者所有胎儿都发生死亡时，母猪就会发生流产。

3、实验室诊断

细菌培养。在无菌条件下，取病猪的肝脏、淋巴结、脾脏、肺脏等病料，分别在肉汤培养基、巧克力琼脂平板及麦康凯血琼脂平板上接种，在37℃恒温条件下进行48　h培养，对培养物进行观察。

病原鉴定。取母猪流产产出的死亡仔猪的脑、肺脏、肾脏等病料，在无菌条件下进行研磨，接着经过高速离心提取其DNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)方法，即根据猪细小病毒的基因序列设计特异性引物用于基因扩增，对病原进行鉴定，如果结果呈阳性则可确诊为该病。

血凝试验(HA)。该法是一种检测抗红细胞不完全抗体的方法，且猪细小病毒具有血凝型。操作时，根据血凝试验标准进行操作即可，经过20-30min即可得到诊断结果。

免疫电镜试验。该法是指对待检测样品进行制备标本负染，直接放在电镜下来观察由抗原和抗体组成的复合物。如果是猪细小病毒，能够清楚看到聚集成团的病毒粒子，且不同大小，直径一般在20nm左右，接近六角形，没有囊膜。需要注意的是，必须对免疫电镜试验的结果进行验证，只有同时结合其他实验室检测方法才能够确诊，如RT-PCR、琼扩、血凝等。

4、防控措施

免疫接种。猪场要制定合理的猪细小病毒病的免疫程序，并严格按照其进行免疫接种。在非疫区或者疫区都可使用猪细小病毒疫苗，且任何季节都能够使用。对于阳性猪场，从5月龄到配种前14天后备母猪以及后备公猪都能够接种疫苗；对于阴性猪场，母猪在配种前的任何时间都能够进行免疫接种。但要注意，妊娠母猪不适合接种疫苗。一般来说，经产母猪要选择在分娩后2周左右进行1次接种，每年进行2次接种；种公猪每年也要进行2次接种。对于规模化猪场，最好对猪群免疫抗体定期进行监测，每年适宜在2～3次。

定期检测免疫抗体。猪场检测频率一般为每6个月1次，根据猪群饲养数量的不同，对15%的比例采取随机抽样，对样猪采集血样进行抗体检查，并根据检测结果评定整个猪群的免疫抗体水平，然后结合具体检测结果采取有效措施，如立即对抗体保护率在70%以下的猪进行免疫接种，同时对抗原性物质没有表现出应答反应的猪必须进行淘汰处理。有些养殖规模较小的猪场，要求提高检测意识，确保定期检查猪群的免疫抗体水平。

猪细小病毒病的临床症状
猪群暴发此病时常与木乃伊、窝仔数减少、母猪难产和重复配种等临床表现有关。在怀孕早期30-50天感染，胚胎死亡或被吸收，使母猪不孕和不规则地反复发情。
怀孕中期50-60天感染，胎儿死亡之后，形成木乃伊，怀孕后期60-70天以上的胎儿有自免疫能力，能够抵抗病毒感染，则大多数胎儿能存活下来，但可长期带毒。
病理变化
病变主要在胎儿，可见感染胎儿充血、水肿、出血、体腔积液、脱水(木乃伊化)及坏死等病变。
诊断
根据流行病学、临床症状和病理变化可做出初步诊断，确诊需进一步做实验室诊断。
实验室诊断
病原分离：取流产胎儿、死产仔猪的肾等材料处理后接种细胞进行病毒分离。
病原鉴定：免疫荧光试验、PCR诊断试验、分子杂交试验。
病毒抗原的检查：
（1）PPV荧光抗体直接染色法：在荧光显微镜下观察，若发现接种的细胞片中细胞核不着染，即可确诊。（2）PPV酶标抗体直接染色法：在普通生物显微镜下观察染色情况，若未接种PPV的正常对照细胞片中细胞核无棕色着染现象，而接种的PPV的细胞片中细胞核着染，即可确诊。
（3）PPV血凝试验：若发现稀释后的样品有凝集红细胞的现象，而正常PBS红细胞对照无自凝现象，则可认为样品可疑还需用特异性的PPV标准阳性血清作血凝抑制试验，如能抑制样品的血凝现象，即可确诊为PPV。
血清学检查：血凝和血凝抑制试验(最为常用)。PPV血清中和试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验。
病料采集：取流产胎儿、死产仔猪的肾、睾丸、肺、肝、肠系膜淋巴结或母猪胎盘、阴道分泌物，制成无菌悬液，备用。
防治
采取综合性防制措施：细小病毒（PPV）对外界环境的抵抗力很强，要使一个无感染的猪场保持下去，必须采取严格的卫生措施，尽量坚持自繁自养，如需要引进种猪，必须从无细小病毒（PPV）感染的猪场引进。当HI滴度在1：256以下或阴性时，方准许引进。引进后严格隔离2周以上，当再次检测HI阴性时，方可混群饲养。发病猪场，应特别防止小母猪在第一胎采食时被感染，可把其配种期拖延至9月龄时，此时母源抗体已消失(母源抗体可持续平均21周)，通过人工主动免疫使其产生免疫力后再配种。
疫苗预防公认使用疫苗是预防猪细小病毒病、是提高母猪抗病力和繁殖率的有效方法，已有10多个国家研制出了细小病毒（PPV）疫苗。疫苗包括活疫苗与灭活苗。活疫苗产生的抗体滴度高，而且维持时间较长，而灭活苗的免疫期比较短，一般只有半年。疫苗注射可选在配种前几周进行，以使怀孕母猪于易感期保持坚强的免疫力。为防止母源抗体的干扰可采用两次注射法或通过测定HI滴度以确定免疫时间，抗体滴度大于1：20时，不宜注射，抗体效价高于1：80时，即可抵抗PPV的感染。在生产上为了给母猪提供坚强的免疫力，最好猪每次配种前都进行免疫，可以通过用灭活油乳剂苗两次注射，以避开体内已存在的被动免疫力的干扰。将猪在断奶时从污染群移到没有细小病毒（PPV）污染地方进行隔离饲养，也有助于本病的净化。
要严格引种检疫，做好隔离饲养管理工作，对病死尸体及污物、场地，要严格消毒，做好无害化处理工作。
一、流行病学调查
感染母猪所产的死胎、仔猪及子宫内的排泄物中均含有很高滴度的病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒排毒时间很长甚至终生。感染种公猪也是该病最危险的传染源，可在公猪的精液、精索、附睾、性腺中分离到病毒，种公猪通过配种传染给易感母猪，并使该病传播扩散。
污染的猪舍是猪细小病毒的主要储藏所。在病猪移出、空圈4.5个月，经彻底清扫后，再放进易感猪，仍可被感染。污染的食物及猪的唾液等均能长久地存在传染性。
仔猪、胚胎、胎猪通过感染母猪发生垂直感染；公猪、肥育猪和母猪主要是经污染的饲料、环境经呼吸道、生殖道或消化道感染；初产母猪的感染多数是经与带毒公猪配种时发生的；鼠类也能传播本病。
本病具有很高的感染性，易感的健康猪群—旦病毒传入，3个月内几乎可导致猪群100%感染；感染群的猪只，较长时间保持血清学反应阳性。本病多发生于春、夏季节或母猪产仔和交配季节。母猪怀孕早期感染时，胚胎、胎猪死亡率可高达80%～100%。母猪在怀孕期的前30～40天最易感染，孕期不同时间感染分别会造成死胎、流产、木乃伊、产弱仔猪和母猪久配不孕等不同症状。病毒的感染率与动物年龄呈正比。
二、临床症状
怀孕母猪出现繁殖障碍，如流产、死胎、产木乃伊、产后久配不孕等。其他猪感染后不表现明显的临床症状。
三、诊断
猪细小病毒感染可以依据临诊症状和流行病学做出初步诊断，一般认为，如果仅妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、胎儿发育异常等繁殖障碍症状，同时有证据表明是传染性疾病时，应考虑到猪细小病毒感染的可能，但是进一步确诊必须进行实验室诊断。自从首次报道猪细小病毒病以来，国内外学者对该病的诊断方法进行了大量研究，从病毒分离鉴定、血凝及血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体试验、乳胶凝集试验等，到核酸探针、聚合酶链式反应(PCR)等，但是各种诊断方法各有利弊，其中血凝及血凝抑制试验已经得到了国内外学者的普通认可，在临诊检测中被广泛应用。
病毒分离和鉴定是直接检测病原，其用于诊断的最大优点是结果准确可靠，可以作为最后确诊，但是检测结果常受胎儿死亡时间的影响。一般用于检测该病的病料为流产或死产胎儿的新鲜脏器(如脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等)，其中以肠系膜淋巴结和肝脏的分离率最高。间接免疫荧光技术是鉴定猪细小病毒病抗原可靠而又敏感的诊断技术。取胎猪组织制备冰冻切片，再与标准化试剂反应，在几小时内可以完成试验。免疫荧光抗体技术其有特异、敏感、快速、检出率高的特点，是实验室进行病毒分离鉴定常用的辅助方法。
在猪细小病毒的血清学诊断方法中，血凝抑制(HI)试验是检测猪细小病毒抗体最常用的方法，一般采用试管法或微量法。该方法相对比较简单、方便，灵敏度也较高，不过在该方法操作中，需要对待检血清进行热灭活处理，然后用红细胞泥吸附，以除去血清中的非特异性血凝素，进而用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性血凝抑制因子。影响血细胞凝集的因素有：试验温度、红细胞种类、供血动物的年龄等。近些年，建立了检测PPV血清抗体的乳胶凝集诊断方法，致敏的乳胶抗原与PPV阳性血清反应，可以产生肉眼可见的凝集颗粒，其特异性较高，具有简便、快速、经济等优点，尤其适合于临诊上的现场检测和该病的早期定性诊断，被许多学者誉为“傻瓜技术”。
核酸探针技术是一种分子水平的检测技术，具有快速、敏感、特异性强等特点，特别适用于疾病的早期诊断和类症鉴别诊断，是近二十年来应用较多的一项诊断技术，适宜于实验室进行猪细小病毒感染的诊断。但该方法的技术含量高，只能在专业实验室应用，不适合大面积临诊诊断和现场应用。
本病应与流行性乙型脑炎、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、慢性非典型猪瘟、衣原体感染、猪布氏杆菌病等疾病进行鉴别区分。

四、治疗
1.肌肉注射英国意康的英国多联特配合头孢注射液，每日2次，连用3～5天。
2.对延时分娩的病猪及时注射前列腺烯醇注射液引产，防止胎儿腐败，滞留子宫引起子宫内膜炎及不孕。
3.对心功能差的使用强心药，机体脱水的要静脉补液。
五、体会
.据调查，猪细小病毒病发病率有升高趋势，可能与未经免疫或免疫程序不科学，引种不慎有关。为此要加强该病的引种检疫及免疫工作，实施科学的免疫程序。
2.猪细小病毒病免疫一定要谨慎，使用不当可人为传入病情。猪场无该病感染，最好不免疫，必须免疫时，最好使用灭活苗。
3.对延时分娩的猪要及时引产。实践证明，用前列腺烯醇注射液注射安全可靠，并有利于胎衣排出。
猪细小病毒病，猪乙型脑炎，猪蓝耳病，猪伪狂犬病是母猪四大繁殖障碍性疾病。
病原学
猪细小病毒病的病原是猪细小病毒，属于细小病毒科(Parvoviridae)、细小病毒属(parvovirus)的自主型细小病毒，血清型单一，很少发生变异，所有分离株的血凝活性、抗原性、理化特性及复制装配特性等均十分相似或完全相同，而且猪细小病毒与同型的其他自主型细小病毒在结构与功能方面也存在许多相似之处。成熟的猪细小病毒完整病毒粒子外观呈六角形或圆形，具有典型的二十面立体对称结构，无囊膜，衣壳由32个壳粒组成，直径约为25～28nm。本病毒对外界理化因素有很强的抵抗力，对热具有强大抵抗力，56℃30min不影响其感染性和血凝活性，70℃2h仍不使其丧失感染性和血凝活性，但是80℃5min可使其丧失感染性和血凝活性；对脂溶剂(如乙醚、氯仿等)有抵抗力；对酸、甲醛蒸汽和紫外线均有一定抵抗力；但是在0.5%漂白粉或氢氧化钠溶液中5min即可被杀死。该病毒具有良好的血凝活性，能够凝集人的O型、豚鼠、大鼠、鸡、猫、猴的红细胞，但是不能凝集牛、绵羊、仓鼠、猪的红细胞，其中以凝集豚鼠红细胞为最好，在凝集鸡红细胞时存在个体差异。
本病毒一般只能在来源于猪的生长分裂旺盛的细胞(如原代猪肾、猪睾丸细胞和传代细胞PK-15，IBRS-2等)上增殖，其体外复制是杀细胞性的，细胞病变表现为细胞隆起、变圆、核固缩和溶解，最后许多细胞碎片黏附在一起使受感染的细胞单层外形不整，呈“破布条状”。另外，不同毒株间存在培养温度依赖性差异，从而可以解释不同分离株在猪体内的复制能力和毒力差异的现象。
病理变化
在非妊娠母猪没有发现大体病变和镜下病变，怀孕母猪在自然感染时也没有大体病理变化，但在妊娠后于子宫内人工接种病毒，可以出现固有膜深层和子宫内膜区域出现单核细胞的聚集，导致胎猪出现组织病理变化，引起胎儿的细胞浸润，在胎儿的大脑、脊髓和眼结膜有浆细胞和淋巴细胞形成的血管套，但是子宫的病变更加明显。
妊娠早期的胎儿免疫力低下，感染后可以出现较多肉眼变化，包括不同程度的发育不良，偶尔可见充血和血液渗入组织内，伴随体腔内浆液性渗出物的淤积，出现淤血、水肿和出血，胎儿死亡后随着逐渐变成黑色，体液被重吸收后，呈现“木乃伊化”。由于病毒和病毒抗原大量分布于感染的胚胎组织，死亡胎儿的镜下病变主要是多数组织和血管广泛的细胞坏死
疫苗市场
需求
2011年我国能繁母猪平均存栏量约6,380万头，加上种公猪的存栏量，我国种猪平均存栏量约为7,000万头。按每头种猪每年应免2次测算（每次配种前免疫一次），我国猪细小病毒病疫苗市场容量约有2亿毫升，市场空间巨大。猪细小病毒病尚未纳入国家重大动物疫病政府强制免疫范围，属于养殖户自愿接种。但随着生猪养殖业集约化程度不断提高，该病对生猪养殖业的危害也日趋严重。可以预见，未来几年对猪细小病毒病的自愿接种预防规模将不断扩大。
供应
目前国内生产猪细小病毒病灭活疫苗的企业主要有齐鲁动物保健品有限公司、上海海利生物药品有限公司、武汉科前动物生物制品有限责任公司、中牧实业股份有限公司成都药械厂。猪细小病毒病灭活疫苗采用的毒株系自主研发的CP-99 株，具有产生病毒含量高、免疫原性好的特点，在工艺技术上则采用了新型佐剂、新型灭活剂以及美国先进的超滤系统和乳化技术，产品具有免疫效力强、应激反应小、安全性高的特点，获得了市场广泛认可。